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2022-12-24 05:55| 来源: 网络整理| 查看: 265

【实验技巧】SDS-PAGE如何选择分离胶浓度---那些年你该学会的实验系列(十)英文特生物技术北京有限公司 2018-12-29 

SDS-PAGE电泳时,我该选多大浓度的分离胶呢?

 

分离胶浓度的选择主要取决于目的蛋白的分子量大小,不同的分离胶浓度对不同的目的蛋白分子量的分辨率不一样,以下表格数值仅供参考。

 

         凝胶浓度(%)    线性分离范围(KD)                      15                     12-100                      10                     16-150                      7.5                     36-200                      5.0                     57-250

 

扩展知识

  

 

分离胶和浓缩胶的作用是什么?

浓缩胶和分离胶的PH值不同,前者主要表现为浓缩效用,后者表现为电荷效用和分子筛效用。浓缩效应主要在浓缩胶中完成,浓缩胶的pH6.8,在这个pH条件下,缓冲液中的HCl的Cl离子几乎全部解离,Glycine的等电点为6.0,仅少数解离为负离子,在电场中移动速度很慢。酸性蛋白质在此pH下解离为负离子,三类离子的迁移速率为Cl>一般蛋白质>Gly,电泳开始后,Cl离子泳动快,在其后留下一个低离子浓度区。Gly在电场中移动很慢,造成移动离子的缺乏,于是快慢离子间就形成了一个缺少离子的高压区,在高压区内所有的负离子都会加速移动,当移到Cl离子区域时,高电压消失,蛋白质的移动速度慢下来,当以上稳定状态建立后,蛋白质样品在快慢离子间被浓缩形成一个狭小的之间层,并按蛋白质所带负电荷量的多少依次排列成带,浓缩样品,从浓缩胶进入分离胶后,胶的pH升高,Gly的离解度增大,泳动率上升,又因为它分子小,故超过所有的蛋白质分子,紧跟在Cl离子后,Cl离子迁移后,低离子浓度不再存在,形成了恒定的电场强度,因此,蛋白质样品在分离胶中的分离主要取决于它的电荷性质,分子大小和形状,分离胶的孔径有一定大小,对不同相对质量的蛋白质来说,通过时收到的滞阻作用不同,即使静电荷相等的颗粒,也会由于这种分子筛的效应,把不同大小的蛋白质相互分开。

 

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